DNA Oligonucleótidos
Características Generales.
Purificación.
Después de la síntesis de ADN, la cadena de ADN completada se libera del soporte sólido por incubación en soluciones básicas tales como hidróxido de amonio. Esta solución contiene el oligo de longitud completa requerido, pero también contiene todas las cadenas de ADN que fueron abortados durante la síntesis (secuencias fallidas). Si se sintetizó un 20-mer, la solución también contendrá 19 fracasos mer, 18 fracasos mer, 17 fracasos mer, etc. La cantidad de secuencias de fallo presente está influenciada por la eficiencia de acoplamiento. Estas secuencias incompletas pueden competir con el producto de longitud completa en algunas aplicaciones tales como PCR, y por lo tanto puede ser necesario retirar antes de que el oligo puede ser utilizado con éxito..
Método de Purificación |
Descripción |
Beneficios |
| Desalado | Los oligos se procesan a través de la columna de cromatografía de fase normal que elimina sales, pero no las secuencias fallidas. | Una solución de sal libre de ADN,-listo para el uso; adecuados para muchas aplicaciones de PCR y secuenciación sin purificación adicional. |
| Cartucho | Basado en cromatografía de fase inversa, elimina secuencias fallidas de la síntesis completa. | Proporciona una larga duración de las secuencias necesarias en algunas aplicaciones |
| HPLC | Rendimiento de Fase Inversa cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) elimina las secuencias fallidas o marcadores no incorporados de la misma manera como la purificación del cartucho. | Garantiza alta purificación primer requerida en algunas aplicaciones (=> 85% de larga duración). |
| PAGINAS | Método utilizado para diferenciar el producto de longitud completa de las secuencias fallidas en función del tamaño y conformación. | Proporciona el mayor porcentaje de oligos de larga duración (> = 85%) que se requieren para determinadas aplicaciones exigentes como mutagénesis o la producción de adaptadores. |
